При какъв od600 трябва да се добави Iptg?
При какъв od600 трябва да се добави Iptg?

Видео: При какъв od600 трябва да се добави Iptg?

Отличия серверных жестких дисков от десктопных
Видео: Измерение OD600 микробов - принцип и метод измерения оптической плотности 2023, Февруари
Anonim

Зависи от протеина ви. Всякакъв начин за нестабилни протеини добавете 1 mM IPTG, когато OD (600) достигне 0,7-0,9 и да не надвишава това и може да се нуждаете от PMSF, за да инактивирате протеазите от денатуриращия целеви протеин.

Относно това, колко добавя Iptg за индукция?

Индуцирай с 4 или 40 µl от 100 mM запас от IPTG (крайна концентрация от 40 или 400 µM) и предизвикват за 3 до 5 часа при 37°C.

Впоследствие въпросът е защо вземаме OD при 600nm? OD600 е съкращение, указващо абсорбцията или оптичната плътност на проба, измерена при дължина на вълната от 600 nm. OD600 е за предпочитане пред UV спектроскопията при измерване на растежа във времето на клетъчна популация, тъй като при тази дължина на вълната клетките няма да бъдат убити, както биха били при твърде много UV светлина.

Имайки предвид това, как увеличавате експресията на протеин?

Налични са няколко стратегии за подобряване на разтворимостта на експресирания протеин

  1. Намаляване на скоростта на протеинов синтез.
  2. Промяна на растежната среда:
  3. Ко-експресия на шаперони и/или фолдази.
  4. Периплазмена експресия:
  5. Използване на специфични щамове гостоприемници:
  6. Добавяне на партньор за синтез:
  7. Експресия на фрагмент от протеина:

Може ли Iptg да се автоклавира?

IPTG е химичен аналог на галактозата, който не може да бъде разцепен от ензима В-галактозидаза. По този начин, то мога служат като индуктор за активността на E.coli lac оперона чрез свързване и инактивиране на lac репресора. Крайната концентрация на IPTG в индикаторни плочи-добавени след автоклавиране-трябва да е 0,2 mmol/L.

Популярни по теми